全自动核酸纯化仪纯化核酸的步骤

 

　　全自动核酸纯化仪在裂解液裂解样本后，游离于裂解/结合液中的核酸被磁珠特异性吸附，经过磁棒及磁棒套配合，完结磁吸、搬运、释放和混合等动作使吸附核酸的磁珠与裂解/结合液分离，并在漂洗液孔将与磁珠非特异结合的各种杂质去除，后使核酸分子溶解于洗脱液中。

 

　　全自动核酸纯化仪在分子克隆的所有操作中，基本的操作是核酸的纯化。其关键过程是去蛋白质，通常只要用酚/氯仿。氯仿抽提核酸的溶液即可。每当需要把克隆有某一些所用的酶灭活或去除以便进行下一步时，可进行这种抽提。但是，如要从细胞裂解液等复杂的分子混合物中纯化核酸，则要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白质后，再用有机溶剂抽提。

 

　　这些蛋白酶包含链霉蛋白酶及蛋白酶K等，它们对多种天然蛋白均有活性，用酚氯仿抽提：这两种有机溶剂合用，比单独用酚抽提的除蛋白作用更佳。继而用氯仿抽提则可除掉核酸制品中的痕量酚。

 

　　1.核酸样品置有盖小离心管中，加入等体积的酚/氯仿。

 

　　2.旋涡混匀管内容物，使呈乳状。

 

　　3.12000×g室温离心15秒。

 

　　4.水相移入另一离心管，弃去两相界面和有机相。

 

　　5.重复过程1-4步操作，直至两相界面上见不到蛋白质停止

 

　　6.按下述核酸浓缩法沉淀收回核酸。